Molecular mechanisms of long non-coding RNA ZEB1-antisense RNA1 in regulating lymphoma cell proliferation, invasion, and migration by targeting microRNA-224
-
摘要:目的
探讨长链非编码RNA ZEB1反义RNA1(LncRNA ZEB1-AS1)通过靶向微小RNA(miR)-224调控淋巴瘤细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制。
方法体外培养淋巴瘤细胞系Raji, 分别转染si-NC、si-ZEB1-AS1、miR-NC、miR-224 mimics、si-ZEB1-AS1+anti-miR-NC、si-ZEB1-AS1+anti-miR-224。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)评估LncRNA ZEB1-AS1和miR-224在淋巴瘤细胞中的表达量; 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力; 采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力; 通过双荧光素酶报告实验确定LncRNA ZEB1-AS1对miR-224的调控作用; 采用Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达水平。
结果与对照组比较, 淋巴瘤组LncRNA ZEB1-AS1水平升高, miR-224表达水平降低，差异有统计学意义(P < 0.05)。与si-NC组比较, si-ZEB1-AS1组中LncRNA ZEB1-AS1的表达水平、光密度(OD)值、迁移细胞和侵袭细胞数量，以及CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达水平均降低，差异有统计学意义(P < 0.05)。与miR-NC组比较, miR-224组miR-224表达水平提高，而OD值、细胞迁移和侵袭数量以及CyclinD1、MMP-2和MMP-9表达水平降低，差异有统计学意义(P < 0.05)。上调miR-224水平可降低WT-ZEB1-AS1的荧光素酶活性，但不影响MUT-ZEB1-AS1的荧光素酶活性。与pcDNA-NC组相比, pcDNA-ZEB1-AS1组miR-224表达水平降低，差异有统计学意义(P < 0.05); 与si-NC组比较, si-ZEB1-AS1组miR-224表达升高，差异有统计学意义(P < 0.05)。与si-ZEB1-AS1+anti-miR-NC组比较, si-ZEB1-AS1+anti-miR-224组的OD值、迁移和侵袭数量，以及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白水平提高，差异有统计学意义(P < 0.05)。
结论抑制LncRNA ZEB1-AS1从而靶向上调miR-224的表达，能够有效降低淋巴瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力。
Abstract:ObjectiveTo investigate the molecular mechanisms of long non-coding RNA ZEB1-antisense RNA1 (LncRNA ZEB1-AS1) in regulating lymphoma cell proliferation, invasion, and migration by targeting microRNA (miR)-224.
MethodsThe lymphoma cell line Raji was cultured in vitro and transfected with si-NC, si-ZEB1-AS1, miR-NC, miR-224 mimics, si-ZEB1-AS1+anti-miR-NC, and si-ZEB1-AS1+anti-miR-224, respectively. Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) was used to assess the expression levels of LncRNA ZEB1-AS1 and miR-224 in lymphoma cells. Cell viability was detected using the Cell Counting Kit-8 (CCK-8). Cell migration and invasion abilities were evaluated by Transwell experiments. Dual luciferase reporter experiments were conducted to confirm the regulatory effect of LncRNA ZEB1-AS1 on miR-224. Western blot was performed to detect the expression levels of cyclin D1 (CyclinD1), matrix metalloproteinase (MMP)-2, and MMP-9 proteins.
ResultsCompared with the control group, the lymphoma group showed increased LncRNA ZEB1-AS1 levels and decreased miR-224 expression levels (P < 0.05). Compared with the si-NC group, the si-ZEB1-AS1 group exhibited decreased expression levels of LncRNA ZEB1-AS1, optical density (OD) values, the number of migrated and invaded cells, and expression levels of CyclinD1, MMP-2, and MMP-9 protein (P < 0.05). Compared with the miR-NC group, the miR-224 group showed increased miR-224 expression levels but decreased OD values, the number of migrated and invaded cells, and expression levels of CyclinD1, MMP-2, and MMP-9 proteins (P < 0.05). Upregulation of miR-224 levels reduced the luciferase activity of WT-ZEB1-AS1 but had no effect on MUT-ZEB1-AS1 luciferase activity. Compared with the pcDNA-NC group, the pcDNA-ZEB1-AS1 group showed decreased miR-224 expression levels (P < 0.05); compared with the si-NC group, the si-ZEB1-AS1 group showed increased miR-224 expression levels (P < 0.05). Compared with the si-ZEB1-AS1+anti-miR-NC group, the si-ZEB1-AS1+anti-miR-224 group showed increased OD values, the number of migrated and invaded cells, and expression levels of CyclinD1, MMP-2, and MMP-9 proteins(P < 0.05).
ConclusionInhibition of ZEB1-AS1 to targetedly upregulate of miR-224 expression can effectively reduce lymphoma cell proliferation, invasion, and migration abilities.
-
Keywords:
- long non-coding RNA ZEB1-antisense RNA1 /
- lymphoma /
- microRNA-224 /
- proliferation /
- migration /
- invasion
-
-
![]()
图 1 LncRNA ZEB1-AS1对淋巴瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响
A: RT-qPCR分析LncRNA ZEB1-AS1相对表达水平; B: Transwell实验分析细胞迁移和侵袭情况(放大200倍);
C: CCK-8实验评估细胞活力; D: Western blot评估蛋白表达情况。2组比较, *P < 0.05。![]()
图 2 miR-NC组和miR-224组中miR-224水平对淋巴瘤细胞的作用
A: RT-qPCR分析miR-224相对表达水平; B: Transwell实验分析细胞迁移和侵袭情况(放大200倍);
C: CCK-8实验评估细胞活力; D: Western blot评估蛋白表达水平。2组比较, *P < 0.05。![]()
图 3 敲低miR-224和LncRNA ZEB1-AS1表达的下调对淋巴瘤细胞恶性行为的影响
A: CCK-8实验评估细胞活力水平; B: Transwell实验分析迁移和侵袭情况(放大200倍);
C: Western blot评估蛋白表达情况。2组比较, *P < 0.05。表 1 2组LncRNA ZEB1-AS1和miR-224的表达水平(x±s)(n=9)
组别 LncRNA ZEB1-AS1 miR-224 对照组 1.00±0.10 1.01±0.12 淋巴瘤组 3.71±0.18* 0.37±0.03* LncRNA ZEB1-AS1: 长链非编码RNA ZEB1反义RNA1;
miR-224: 微小RNA-224。与对照组比较, * P < 0.05。
下载: 导出CSV
表 2 LncRNA ZEB1-AS1水平对淋巴瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响(x±s)(n=9)
组别 LncRNA ZEB1-AS1 OD值 CyclinD1蛋白 细胞迁移数量/个 细胞侵袭数量/个 MMP-2蛋白 MMP-9蛋白 si-NC组 1.03±0.12 1.14±0.14 0.95±0.09 176.40±14.43 167.89±13.44 0.90±0.09 0.89±0.08 si-ZEB1-AS1组 0.33±0.03* 0.49±0.05* 0.30±0.03* 76.99±6.14* 67.45±5.31* 0.35±0.04* 0.36±0.03* LncRNA ZEB1-AS1: 长链非编码RNA ZEB1反义RNA1; OD: 光密度; CyclinD1: 细胞周期素D1; MMP: 基质金属蛋白酶。与si-NC组比较, * P < 0.05。
下载: 导出CSV
表 3 miR-NC组和miR-224组中miR-224水平对淋巴瘤细胞的作用(x±s)(n=9)
组别 miR-224 OD值 CyclinD1蛋白 细胞迁移数量/个 细胞侵袭数量/个 MMP-2蛋白 MMP-9蛋白 miR-NC组 1.00±0.10 1.36±0.25 0.92±0.10 165.38±10.11 175.68±16.77 0.88±0.08 0.88±0.08 miR-224组 3.13±0.25* 0.45±0.04* 0.31±0.03* 82.34±15.17* 92.30±7.37* 0.29±0.02* 0.28±0.02* OD: 光密度; CyclinD1: 细胞周期素D1; MMP: 基质金属蛋白酶。与miR-NC组比较, * P < 0.05。
下载: 导出CSV
表 4 荧光素酶活性检测结果(x±s)(n=9)
组别 荧光素酶活性 WT-ZEB1-AS1 MUT-ZEB1-AS1 miR-NC组 1.00±0.10 1.00±0.10 miR-224组 0.37±0.03* 0.99±0.09 WT-ZEB1-AS1: 野生型ZEB1反义RNA1;
MUT-ZEB1-AS1: 突变型ZEB1反义RNA1。
与miR-NC比较, * P < 0.05。
下载: 导出CSV
表 5 RT-qPCR检测各组miR-224水平(x±s)(n=9)
组别 miR-224 pcDNA-NC组 1.02±0.11 pcDNA-ZEB1-AS1组 0.33±0.03* si-NC组 1.03±0.11 si-ZEB1-AS1组 2.99±0.16# 与pcDNA-NC组比较, * P < 0.05; 与si-NC组比较, #P < 0.05。
下载: 导出CSV
表 6 敲低miR-224和LncRNA ZEB1-AS1表达的下调对淋巴瘤细胞恶性行为的影响(x±s)(n=9)
组别 OD值 CyclinD1蛋白 细胞迁移数量/个 细胞侵袭数量/个 MMP-2蛋白 MMP-9蛋白 si-ZEB1-AS1+anti-miR-NC组 0.40±0.04 0.37±0.04 82.37±8.77 79.06±16.98 0.23±0.02 0.25±0.02 si-ZEB1-AS1+anti-miR-224组 1.58±0.36* 0.93±0.09* 196.36±18.83* 165.96±20.63* 0.89±0.08* 0.87±0.07* OD: 光密度; CyclinD1: 细胞周期素D1; MMP: 基质金属蛋白酶。与si-ZEB1-AS1+anti-miR-NC组比较, * P < 0.05。
下载: 导出CSV
-
[1] KATAOKA J, NITTA T, OTA M, et al. Collision tumor comprising primary malignant lymphoma and adenocarcinoma in the ascending colon[J]. Case Rep Gastroenterol, 2021, 15(1): 379-388. doi: 10.1159/000513972
[2] CHENG J W, LI J H. Intravascular large B-cell lymphoma[J]. N Engl J Med, 2023, 389(23): 2188. doi: 10.1056/NEJMicm2307122
[3] WEI G H, LU T, SHEN J, et al. LncRNA ZEB1-AS1 promotes pancreatic cancer progression by regulating miR-505-3p/TRIB2 axis[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2020, 528(4): 644-649. doi: 10.1016/j.bbrc.2020.05.105
[4] SHARMA U, BARWAL T S, KHANDELWAL A, et al. LncRNA ZFAS1 inhibits triple-negative breast cancer by targeting STAT3[J]. Biochimie, 2021, 182: 99-107. doi: 10.1016/j.biochi.2020.12.026
[5] WANG W T, WANG T, LIN H Y, et al. Ropivacaine combined with sorafenib attenuates hepatocellular carcinoma cell proliferation and metastasis by inhibiting the miR-224/HOXD10 axis[J]. Environ Toxicol, 2024, 39(4): 2429-2438. doi: 10.1002/tox.24111
[6] 阳媚媛, 王道荣. MiR-224在结直肠癌中的研究进展[J]. 国际外科学杂志, 2018, 45(12): 850-854. doi: 10.3760/cma.j.issn.1673-4203.2018.12.015 [7] SOARDO G, CASTALDO V, DONNINI D, et al. Monomorphic epitheliotropic intestinal T cell lymphoma of the appendix: a case report and review of literature[J]. J Gastrointest Cancer, 2020, 51(2): 688-694. doi: 10.1007/s12029-020-00363-6
[8] SAITO M, WAGES N A, SCHIFF D. Correction to: incidence, risk factors and management of venous thromboembolism in patients with primary CNS lymphoma[J]. J Neurooncol, 2021, 154(1): 49. doi: 10.1007/s11060-021-03809-4
[9] 符环, 袁晟, 金成豪. Twist、ZEB1和Slug在滤泡性淋巴瘤中的表达及其意义[J]. 世界最新医学信息文摘, 2018, 18(96): 22-23. [10] 石岳坚, 郑翠苹, 蒋义, 等. MicroRNA-224在弥漫大B细胞淋巴瘤患者石蜡样本中的表达及临床意义[J]. 临床血液学杂志, 2015, 28(6): 961-965. [11] XIE Y, TAN L, LI Y T, et al. Mechanism of miR-224 affecting DLBCL cell proliferation and invasion by targeted inhibition of PIK3CD[J]. Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi, 2020, 28(5): 1578-1584.
[12] TAO S, CHEN Y, HU M, et al. LncRNA PVT1 facilitates DLBCL development via miR-34b-5p/Foxp1 pathway[J]. Mol Cell Biochem, 2022, 477(3): 951-963. doi: 10.1007/s11010-021-04335-7
[13] ZHANG Y, XIANG J J, ZHU N, et al. Curcumin in combination with omacetaxine suppress lymphoma cell growth, migration, invasion, and angiogenesis via inhibition of VEGF/akt signaling pathway[J]. Front Oncol, 2021, 11: 656045. doi: 10.3389/fonc.2021.656045
[14] 李静, 史颖红, 刘庆荣. 弥漫性大B细胞淋巴瘤患者致癌转录因子1和miR-224表达与临床病理特征及预后的关系[J]. 中国慢性病预防与控制, 2019, 27(10): 776-779. [15] 张姗, 邓锐, 李业成, 等. MiR-224-5p通过靶向SMAD5对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的调控作用[J]. 西部医学, 2021, 33(3): 363-369. doi: 10.3969/j.issn.1672-3511.2021.03.011 [16] QU R Z, CHEN X M, ZHANG C. LncRNA ZEB1-AS1/miR-409-3p/ZEB1 feedback loop is involved in the progression of non-small cell lung cancer[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2018, 507(1/2/3/4): 450-456.
[17] XU R D, FENG F, YU X S, et al. LncRNA SNHG4 promotes tumour growth by sponging miR-224-3p and predicts poor survival and recurrence in human osteosarcoma[J]. Cell Prolif, 2018, 51(6): e12515. doi: 10.1111/cpr.12515
-
期刊类型引用(36)
1. 何巧玲，白荣飞. 中医特色技术对脊柱骨折患者术后疼痛、功能康复及预后的影响分析. 婚育与健康. 2025(03): 124-126 . 
百度学术
2. 卢哲，高萍，王洁，赵辰，方艳，周文珏，余雪，蔡西国. 通脉化瘀方内服结合定向透药技术在脑卒中上肢偏瘫中的应用研究. 中华中医药学刊. 2025(03): 250-253 . 百度学术
3. 李家玲，邓雄伟，蔡飞燕. 大承气汤加减方神阙穴贴敷联合吐纳法预防老年股骨粗隆间骨折便秘的疗效观察. 中国当代医药. 2024(02): 111-114+118 . 百度学术
4. 应莺. 基于中医时间理论的个性化中医护理在急诊科的应用效果. 中医药管理杂志. 2024(06): 155-158 . 百度学术
5. 周加平，黎清交，范星华，张观辉. 皮内针联合穴位贴敷治疗脊柱骨折后便秘患者的效果观察. 基层医学论坛. 2024(13): 154-156 . 百度学术
6. 王婷，王亚静，肖翔. 中药定向透药联合穴位贴敷对类风湿关节炎患者疼痛及关节功能的影响. 现代诊断与治疗. 2024(03): 346-348 . 百度学术
7. 全玮玮，项少茜，林玉丽，吴惠明. 中医特色护理临床路径在骨质疏松性胸腰椎压缩骨折患者经皮穿刺椎体后凸成形术围手术期的临床应用. 中国医药导报. 2024(14): 157-159 . 百度学术
8. 石瑞梅. 胸腰椎骨折内固定术后应用穴位贴敷联合穴位按摩临床观察. 实用中医药杂志. 2024(06): 1217-1219 . 百度学术
9. 邱兵，黄纡寰. 中医定向透药联合护理干预对COPD急性加重期患者肺功能和满意度的影响. 上海医药. 2024(06): 18-20+49 . 百度学术
10. 刘根云，周艳. 中医综合护理在脊柱骨折患者围手术期中的应用. 基层医学论坛. 2024(21): 149-152 . 百度学术
11. 李懿. 子午流注理论指导大黄穴位贴敷在阿片类药物所致便秘患者中的应用效果分析. 反射疗法与康复医学. 2024(01): 7-10 . 百度学术
12. 张东芝，孙敬争，吕萍，王丹，谭红霞. 砭石中药膏摩在胸腰椎骨折术后便秘中的应用效果分析. 中国烧伤创疡杂志. 2024(04): 306-309 . 百度学术
13. 方利英，闫静，董丰琴，曹秋香. 以专业核心能力为导向聚焦中医临床思维能力的思考. 中医药管理杂志. 2024(16): 72-74 . 百度学术
14. 钟喜艳，周雄儿，周小兰. “子午流注”指导下大黄穴位贴敷联合辨证施膳治疗胸腰椎骨折便秘的疗效观察. 山西医药杂志. 2024(16): 1260-1263 . 百度学术
15. 王小丽，郭婷婷，丁志香. 联合刺激加中医疗法在脊柱骨折病人术后便秘防治中的应用. 循证护理. 2024(21): 3946-3949 . 百度学术
16. 盛珊珊. 中医定向透药疗法联合穴位贴敷对中风后偏瘫患者肢体肌力及运动功能的影响. 反射疗法与康复医学. 2024(21): 46-49 . 百度学术
17. 温友林，刘秋江. 气阴两虚型便秘的中医药治疗进展. 中外医学研究. 2023(05): 166-171 . 百度学术
18. 赵莎莎，谷绍芬. 基于子午流注理论择时中药保留灌肠在慢性盆腔炎病人中的应用. 全科护理. 2023(10): 1365-1367 . 百度学术
19. 吴丽，王志姝，管琦. 热敏灸联合子午流注穴位贴敷对肾阴虚型卵巢早衰的应用效果. 临床护理杂志. 2023(02): 21-24 . 百度学术
20. 刘翠红，胡兵，刘欣，蔡虹，季红. 中医护理技术在预防围术期患者便秘中的应用进展. 齐鲁护理杂志. 2023(12): 145-148 . 百度学术
21. 李晓云，罗琳琳，郭猷殚，夏晓健. 中药贴敷联合定向透药疗法在无创呼吸机辅助通气致腹胀中的应用研究. 上海医药. 2023(14): 26-28+45 . 百度学术
22. 王琦，张禹，樊毅. 经椎弓根椎体内植骨联合短节段固定治疗老年脊柱骨折的效果观察. 中国实用医刊. 2023(14): 21-24 . 百度学术
23. 朱洁琼，周桂明. 中医透药理疗联合文拉法辛治疗抑郁症的疗效及对血清5-HT、NE、BDNF水平的影响. 湖北科技学院学报(医学版). 2023(05): 424-427 . 百度学术
24. 张安珍. 腹部按摩护理联合“温阳法”定向透药治疗仪治疗慢性便秘的效果. 循证护理. 2023(22): 4150-4153 . 百度学术
25. 张敬，刘芳，刘菁祖，杨博文. 子午流注理论指导下穴位贴敷在多节段腰椎间盘突出症术后腹胀、便秘护理中的疗效评价. 中医药临床杂志. 2023(11): 2227-2231 . 百度学术
26. 汤晓燕，汤丽琼，方子燕. 基于子午流注理论穴位贴敷在结肠镜检查肠道准备中的应用. 新中医. 2023(22): 188-191 . 百度学术
27. 荆婷婷，李瑞，王丹，李艳梅. 子午流注理论指导下穴位按摩及中药热敷应用于糖尿病肾病便秘患者的效果. 医学理论与实践. 2023(24): 4303-4305 . 百度学术
28. 石艳，仲崇煊. 中药穴位贴敷结合情志护理在骨折卧床便秘患者中的应用效果. 中外医疗. 2023(26): 146-150 . 百度学术
29. 张正浩，熊辉. 穴位贴敷联合中医定向透药在脊柱骨折术后便秘患者中的应用. 长治医学院学报. 2023(06): 439-442 . 百度学术
30. 高永金，纪亚丽，邱榕，朱荣华. 中医辨证论治对功能性出口梗阻型便秘患者的肛肠动力学影响. 中医临床研究. 2022(09): 33-35 . 百度学术
31. 全红梅，聂艳芳，张慧慧，郭刚. 耳穴压丸联合艾灸在髋部骨折术后虚秘患者护理中的应用效果. 临床与病理杂志. 2022(08): 1988-1994 . 百度学术
32. 张建军，刘海永，王娟，刘艳东，刘雅丽，白荟芳，凌书娟，王凤林. 自拟消胀清宿汤结合针刺治疗气机阻滞型习惯性便秘的临床效果. 中国医药导报. 2022(33): 128-133 . 百度学术
33. 王海强，马晨曦，石璠，熊丽，张萌，刘贵军. 腹针联合穴位透药治疗便秘型肠易激综合征临床研究. 针灸临床杂志. 2022(12): 20-24 . 百度学术
34. 孙琰，杨六中，李朝顶. “血水同治”理论指导下中药穴位贴敷联合循经点按预防骨折术后深静脉血栓的临床研究. 内蒙古中医药. 2022(12): 97-98 . 百度学术
35. 左同军. 子午流注纳子法联合俞募配穴针刺治疗胆心综合征疗效观察. 上海针灸杂志. 2021(09): 1064-1069 . 百度学术
36. 陈丽华，黄纯燕，刘楚，谢晓莹，许海鹏. 中医定向透药联合穴位贴敷治疗小儿肺炎喘嗽(风热闭肺)临床观察. 实用中医内科杂志. 2021(12): 139-142 . 百度学术
其他类型引用(5)
计量
- 文章访问数: 92
- HTML全文浏览量: 16
- PDF下载量: 17
- 被引次数: 41
苏公网安备 32100302010246号