摘要:
目的 克隆并表达淋病奈瑟菌孔蛋白PorB,以重组蛋白为抗原,间接ELISA检测免疫血清的抗体水平.方法 利用PCR从淋病奈瑟菌WHO株基因组中扩增出PorB的基因,克隆入原核表达载体pET-30a中,构建出重组表达质粒pE'T30a-PorB,并转化大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.表达的蛋白进行SDS-PAGE分析,Western blot检测其反应原性.以纯化的重组蛋白rPorB作为检测抗原建立间接ELISA方法,用于检测淋病疫苗pVAX1-PorB免疫小鼠后的血清抗体水平.结果 PCR扩增得到淋病奈瑟菌孔蛋白PorB基因,表达的重组蛋白rPorB相对分子质量约40 kD,经Ni-NTA亲和层析纯化后的rPorB在SDS-PAGE中显示单一条带,Western blot证明纯化后的rPorB可与淋病奈瑟菌免疫血清特异性结合,具有良好的免疫反应性.间接ELISA结果表明,淋病疫苗pVAX1-PorB免疫小鼠血清PorB特异性抗体滴度为1∶200.结论 成功构建了重组原核表达质粒pET30a-PorB,PorB在大肠杆菌中获得表达.以纯化的rPorB为检测抗原,间接ELISA可以用于淋病疫苗免疫效果的评价.该研究为淋病奈瑟菌感染诊断、疫苗的研究奠定了基础.
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