NKG2D-IL-21融合基因修饰的结肠癌细胞体外刺激NK细胞活化的研究

基金项目: 国家自然科学基金，江苏省自然科学基金，扬州市-扬州大学合作基金，国家级大学生创新创业训练计划。

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Study of NK cell activation by colon cancer cells genetically modified with NKG2D-IL-21 fusion gene ex vivo

摘要: 目的观察含NKG2D-IL-21融合基因的重组表达载体转染结肠癌细胞后对NK细胞活化的影响.方法首先利用DNA限制性内切酶鉴定插入真核表达载体(pcDNA3.1-NKG2D-IL-21)的NKG2D和IL-21基因序列,并通过脂质体介导质粒转染结肠癌细胞株CT-26.流式细胞术胞内染色法检测CT-26内NKG2D-IL-21融合蛋白的表达,酶联免疫吸附实验鉴定细胞培养上清NKG2D-IL-21蛋白的含量.最后将经基因转染的CT-26细胞与小鼠脾脏NK细胞共培养,流式细胞术检测NK细胞表面活化性受体CD69的表达.结果 NKG2D-IL-21融合基因稳定插入pcDNA3.1载体.CT-26细胞经外源性NKG2D-IL-21融合基因转染后,表达含有NKG2D和IL-21的融合蛋白.分泌NKG2 D-IL-21融合蛋白的CT-26细胞具有明显促进NK细胞表达CD69的活性.结论重组pcDNA3.1-NKG2D-IL-21真核表达载体可作为一种新型DNA疫苗.
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