摘要: 目的 通过rhuPAa-melittin在80 L发酵罐中的发酵表达,优化发酵条件及改进适合大规模纯化的方法,获得纯化的目的蛋白.方法 采用实验制备的rhuPAa-melittin重组质粒,通过电转化法将rhuPAa-melittin-pPICZαC载体转入毕赤酵母(Pichia pastoris)中,用PCR法扩增和检测rhuPAa-melittin基因在毕赤酵母基因组中的整合.利用毕赤酵母进行小量发酵,摸索最佳表达时间、pH及最佳的纯化方法.通过rhuPAa-melittin在80 L发酵罐中的发酵表达,优化发酵条件及改进适合大规模纯化的方法.结果 rhuPAa-melittin发酵条件在温度为28℃～30℃,FM21培养基中添加0.5％的蛋白胨,甲醇最终的流加速度控制在9 mL/(h.L),初始发酵液体积、DO值(溶解氧)在25％～ 30％,发酵时间为12h,pH在6.0～7.0时获得高产量、高纯度、高收率的蛋白.结论 获得产量约350 mg/L,纯度可达96％以上,收率可达65％左右的rhuPAa-melittin蛋白.