心脏转录因子Nkx2.5真核表达质粒的构建
Construction of Eukaryotic expression Recombinant Plasmid pCMV-HA-Nkx2.5
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摘要: 目的 构建人类心脏特殊转录因子Nkx2.5的真核表达质粒,为进一步探讨Nkx2.5在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础.方法 以质粒pCMV6-XL5-Nkx2.5为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2.5编码区序列,将真核表达载体pCMV-HA和Nkx2.5的PCR产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCMV-HA-Nkx2.5,转化至大肠杆菌,提取质粒后经PCR、双酶切及测序鉴定.结果 成功设计引物扩增出Nkx2.5基因编码区约1 000 bp的目的 片段,PCR和酶切鉴定结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2.5基因序列.结论 成功构建了含有Nkx2.5的真核表达重组质粒,为后续研究奠定基础.
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