摘要:
目的 构建含融合自杀基因Fcy::Fur重组逆转录病毒, 用自杀基因治疗系统Fcy::Fur/ 5-氟胞嘧啶(5-FC)对裸鼠胶质瘤进行体内抑瘤作用的实验研究.方法 扩增Fcy::Fur基因并构建Fcy::Fur基因重组逆转录病毒载体;载体转染包装细胞获得高滴度病毒并转染鼠胶质瘤细胞C6, 筛选并鉴定阳性转基因克隆;构建裸鼠荷胶质瘤动物模型,腹腔注射5-FC, 观察裸鼠肿瘤重量变化及电镜、流式细胞仪(FCM)检测肿瘤的凋亡.结果 PCR法扩增出全长Fcy::Fur基因, 经测序证实序列正确;构建了PLXSN-Fcy::Fur逆转录病毒载体, 载体转染包装细胞PT67,获得滴度为3.5×106 CFU/mL的逆转录病毒;转染C6获转基因阳性克隆C6-Fcy::Fur,检测C6-Fcy::Fur有Fcy::Fur基因的mRNA 表达;裸鼠前肢背部接种转基因细胞,成瘤后腹腔注射5-FC, 转基因肿瘤的生长较对照组明显抑制.FCM法检测到凋亡峰,电镜观察到转基因肿瘤细胞有凋亡小体.结论 AdE1CMVCD 与5-FC联合在体内对胶质瘤有明显的抑制作用,为临床胶质瘤基因治疗提供了可靠的理论及应用依据.
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