人IL-18突变体D134R的构建及其生物学活性分析

The Construction of Human IL-18 Mutant D134R and Its Effects on hIL-18 Biological Activity

摘要: 目的研究IL-18结构与功能的关系.方法用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白介素18(hIL-18)突变体hIL-18D134R.将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α.经热诱导表达蛋白质,SDS-PAGE证实,表达的目的蛋白质以包涵体形式存在.菌体经超声破碎后,包涵体以2 mol/L尿素洗涤,8 mol/L尿素溶解,并经Sephadex G-75柱纯化及稀释、透析复性.然后以诱导人外周血单个核细胞(PBMC)产生干扰素-γ(IFN-γ)及对核因子-κB(NF-κB)的激活能力为指标,检测突变体的生物学活性.结果构建的突变体hIL-18D134R可在大肠杆菌DH5α中高效表达,经包涵体洗涤和Sephadex G-75柱纯化后,纯度达92 %以上.突变体D134R对IFN-γ的诱生能力及对NF-κB的激活能力分别为野生型hIL-18的19%和23%.结论在人IL-18的氨基酸序列中,Asp134对其生物学功能有非常重要的作用.