利用流式细胞仪检测人外周血NK细胞毒性方法的建立

MEASURING HUMAN PERIPHERAL NK CELL CYTOTOXICITY WITH FLOW CYTOMETRY

摘要: 目的利用流式细胞仪(FACS)技术检测人外周血NK细胞的毒性.方法首先将pEGFP-N1质粒转染人NK细胞的天然靶细胞K562, 经过G418筛选后进一步单克隆化,得到稳定、均一表达绿色荧光蛋白的K562细胞.取对数期的K562-EGFP细胞与人外周血单个核细胞分别按5∶1、10∶1、20∶1、40∶1的比例混合,分别孵育0.5、1、2、4 h后用碘化丙啶(PI)标记,用流式细胞仪分析呈红、绿色荧光的细胞数,最后计算NK细胞的杀伤效率.结果 0.5、1、2、4 h均能得到明显的杀伤效果,而且以2h的杀伤率最高.此时杀伤率与传统乳酸脱氢酶法(LDH)具有显著相关性(γ＝0.997, P=0.003), 而且显示出更强的敏感性.结论利用流式细胞仪检测NK细胞毒活性的方法可作为传统51Cr释放法、LDH法的一个补充,而且具有经济、快速和敏感的特点.